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5'... C A G/C T G...3' 3'... G T C/G A C...5' 快速内切酶，可在5~15 min内完成反应 反应温度为37℃ 受EcoBI甲基化影响，序列可能重叠，剪切可能受影响 不可热失活 3 h温育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性