MonScript™ RTIII All-in-One Mix with dsDNase是针对一链cDNA合成开发出的一个操作更为简便的系统,包含所有一链cDNA合成反应所需组分(MonScript™ RTase III及其反应Buffer、RNA酶抑制剂、dNTPs, Oligo(dT)20VN和随机引物等),反应中仅需加入RNA模板和水。预混液中的 MonScript™ RTIII(REF: MR00201)是基于M-MLV RTase开发的第三代逆转录酶,该酶去除了RNase H活性,反应温度高达55℃,大幅提升了逆转录效率和对复杂模板(高GC比例或大量二级结构)的耐受性,特异性更好、产率更高、更容易获得全长cDNA。使用该逆转录预混液15分钟内最长可获得12 kb大小的cDNA,获得的cDNA下游推荐用于qPCR。
该预混液采用高效的dsDNase,该酶具有热敏感性,可在高温条件下快速不可逆地失活,因此仅需一次加样,即可同管进行去除基因组DNA污染与逆转录反应,与使用 DNase I去除基因组DNA污染相比,无需额外加入EDTA进行失活,不仅减少了对RNA模板的损伤、降低RNase污染风险,而且节省实验时间。